1、重要的洗刷：

　　不充分的洗刷會導致差異和高布景，從而帶來不抱負的試驗結果。假如未結合的材料殘留在微孔板中，那么它會添加布景噪音。有必要的話，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反響。假如布景過高，置疑洗刷不行時，能夠測驗添加洗刷次數。

　　2、關鍵的關閉：

　　關閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的時機。假如布景過高，置疑關閉不充分，那么能夠測驗運用更高濃度的關閉液，或適當延伸關閉時間。

　　現在主要有兩種類型的關閉液：蛋白和非離子型去污劑。ELISA試劑盒運用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的關閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。

　　3、抗體濃度須優化：

　　假如試劑稍有不同，則或許需求優化抗體的量。非特異的抗體結合會添加布景。為了防止這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。

　　4、檢測試劑要適量：

　　切勿運用過多的檢測試劑。假如濃度過高，ELISA試劑盒或許未正確稀釋，則會導致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。

　　只要確保每一步操作都做到位，才會出現的試驗結果。所以ELISA試驗的每一步都很重要，不能夠漫不經心。